在细胞计数板中直接识别脑脊液隐球菌的方法
隐球菌性脑膜炎(简称隐脑)是一种中枢神经系统感染性疾病。在该病早期，较难与结核、病毒及其他细菌性脑膜炎相鉴别。一旦出现典型症状，治疗效果差，死亡率高，因此早诊断、早治疗是提高治愈率的关键。若脑脊液(CSF)中隐球菌在做细胞计数时能初步识别，将能提高对该病的早期诊断率。自年以来，我们共查获隐球菌阳性患者19例，均为计数时发现，并通过墨汁染色证实。这种在细胞计数板中直接识别并计数隐球菌的方法提高了隐脑的治愈率。
一、材料和方法1.对象：通过墨汁染色确诊的隐脑患者19例，其中男14例，女5例，年龄21一62岁。2.实验器材：双目电光源生物显微镜(宁波光学仪器厂);血细胞计数板(上海求精生化试剂仪器厂);侯氏CSF细胞沉淀器(南京医科大学产);碳素墨水(上海墨水厂生产)。3.方法：(1)常规腰穿取CSF3一4耐分2瓶送检。第1瓶以r/min离心10min后取沉淀作墨汁染色用;(2)按细胞计数的方法将第2瓶混匀的CSF充人计数池内，先在低(高)倍镜下用计数细胞的最佳光线计细胞及隐球菌总数，每次数9个大方格(〕2次)取平均值，结果除以9乘10即得每微升总数。然后将光线调暗(镜检最弱光)，并用微调使焦距增大，直至能较清楚看到隐球菌荚膜为止。再计隐球菌数，从总数中减去隐球菌数即得细胞数;(3)进行墨汁染色，将CSF沉淀打散，取大约1/4滴移至玻片，再加碳素墨水少许用玻棒混成均匀膜状，低倍镜观察，可见折光极强的隐球菌宽厚荚膜及折光较弱的菌体。
二、结果1.用细胞计数法，19例隐脑患者CSF均可见隐球菌。全组有9例治疗后菌数下降，6例痊愈出院，3例回当地治疗;另ro例隐球菌计数50个/闪的患者，5例死亡，5例放弃治疗。2.所有患者用墨汁染色证实均为隐球菌阳性，但菌数较少者需反复制片。
三、讨论一般情况下临床医生未要求查隐球菌，检验者很少主动做墨汁染色，这是造成隐脑延诊和漏诊的主要原因。加之墨汁染色制片质量好坏是决定能否检出隐球菌的关键。若在细胞计数时就能初步发现隐球菌，隐脑就不易漏诊。全组有过半数(10例)并未提示隐脑诊断，其中6例(死亡病例4例)曾做过CSF检查未查出隐球菌，我们均在计数时发现了隐球菌。只有掌握计数板中隐球菌的特点，才能在计数板中识别隐球菌。隐球菌阳性的CSF标本在计数时有如下特点:(1)白细胞数高，一般30个/闪;(2)“细胞”大小不均，大的比正常白细胞大1倍以上，偶见牙抱，小的约为白细胞的1/4，此点对初步发现隐球菌尤为重要;(3)折光特别，白细胞折光性强，红细胞折光性弱，而隐球菌介于两者之间;(4)白细胞周边有较薄“黑圈”(膜)，红细胞周边有较厚“黑圈”，隐球菌则有更厚的“黑圈”;(5)调弱光线和略增焦距可见荚膜。以上各点需综合运用，不能孤立判断。墨汁染色阳性是隐脑的确诊手段，即使在计数时确认是隐球菌，还须用墨汁染色证实。制片时，离心后的CSF沉淀不宜留得过多，约1/4滴(或更少)即可。加墨汁不宜过多或过少，墨汁过多可遮盖隐球菌，产生假阴性结果，墨汁太少可将白细胞误认成隐球菌产生假阳性结果。以肉眼观察背景全黑刚好成一均匀薄膜状最佳。掌握了隐球菌在计数板中形态学特点及计数方法，还能提高报告质量。不仅使CSF细胞计数更为准确，还可根据隐球菌数动态观察疗效、调整治疗方案和判断预后。因此对隐脑的诊治具有临床实用价值。
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