检验样本采集方法和要求医护版

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1、静脉血样本采集顺序

根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准,建议抽血顺序为:

1、血培养,2、血凝管(蓝帽),3、血清管(红帽/黄帽),4、血浆管(绿帽),5、EDTA管(紫帽),6、血糖管(灰帽),7、其他。

当血凝管为第一支采血管时,应使用不含用添加剂的采血管或血凝管采集第一管血并弃掉,第二管再采集血凝管。在实际工作中,如患者静脉条件较差,有可能采血不足,则应首先考虑凝血(蓝帽)和血沉(黑帽)检测管,因为这两种样本对血量要求最严格。

2.检验样本的采集方法和要求

2.1血液样本

2.1.1静脉血样本

2.1.1.1采集方法

静脉血样本是医护人员采用一次性注射器(推荐使用真空采血技术),从患者肘静脉或其它部位的静脉取血。采集后尽快送检(不超过2小时)。

2.1.1.2注意事项

1.在肌肉注射或静脉输含有葡萄糖或电解质(含钾、钠、氯离子)的液体时,建议3小时以后采集静脉血样本进行这些项目的检验,以防止上述检验项目因输液引起的假性升高。如因抢救等原因需要在输液同时采血的,一定要在输液对侧采集样本,医生应正确评价检测结果。禁止从中心静脉插管、肝素帽等保留的治疗通道中采集血液样本。

2.止血带使用时间应少于1分钟(建议在针头穿刺进入血管后即放松止血带),以免引起血液淤滞,局部组织缺氧,造成血液某些成分的改变,特别是测定乳酸时不可使用止血带,否则结果偏高。

3.血液中红细胞内外成分有很大差异,溶血可造成红细胞内的物质向细胞外转移,如K+、Mg2+和某些酶类(LD、AST、ALT、ACP);另外,溶血还可干扰某些化学项目(TBil、DBil、TC等)的测定,严重影响结果的准确性,血样本应防止溶血。引起溶血的原因有:注射器采血时抽吸力太大;血液与抗凝剂比例失调;混匀样本时过度振荡;注射器或盛血容器带水或容器污染;全血放置时间长或突然受冷或受热;注射器中的血沫注入试管;真空采血时如未采满至相应刻度,残存负压造成红细胞破裂;不拔针头直接注入采血管;样本离心时离心力过大等。

4.正确选择采集管。通常情况下临床检验多采用血清为样本(不抗凝),部分检测项目需注意样本属性为血清或血浆,两者不可替代。一些特殊检验项目需要使用抗凝剂时,应注意选择合适的抗凝剂并注意抗凝剂与血液的比例,以防止样本凝血或红细胞形态的改变;抗凝血样本采集后立即轻轻摇匀(上下颠倒8次),以防凝血发生。

5.多项化验采血顺序:血培养瓶(厌氧瓶优先)→蓝帽管→黑帽管→红/黄帽管→绿帽管→紫帽管→灰帽管→其他。

6.注意样本存放环境温度最好在15~25℃。核医学科PRA、AT-II需冰浴或4℃环境中。未经离心的样本不要冷藏,因为骤冷骤热可能引起样本溶血或细胞形态改变。样本应避免日光直接照射,防止如胆红素、尿酸等对紫外线敏感的物质因曝光而含量降低。样本采集后应尽快送检,保存时间参照各科室项目组合及样本保存运输时间表。

2.1.1.3血型鉴定样本采集

1.样本采集前应确认电子申请单、样本管及患者身份一致,如姓名、性别、年龄、唯一标识(包括住院号、腕带,儿科患者需根据父母或监护人识别)。

2.关于特殊患者(如昏迷患者、新生儿、没有监护人在场的婴幼儿和儿童患者)样本采集前身份确认,需要特别注意,必要时可请主管的医护人员帮助确认,如仍然不能确定,则需要患者/儿的亲属或监护人在场,否则宁可暂不采集样本。

3.除某些特殊情况下(如新生儿和大面积烧伤等患者)外,应尽量采集静脉血样本,以保证检验结果的准确性。新生儿和大面积烧伤等患者可使用5%血球-生理盐水样本。

4.样本采集人员在样本采集后应在采血管上标记采集时间和样本采集者的身份(或可追溯到样本采集者的身份),以帮助检验科在血型鉴定出现疑问时与之联系。

2.1.1.4样本采集前患者的准备

1.避免剧烈运动。强烈肌肉运动明显影响体内代谢,引起血中某些成分浓度的改变,如乳酸、CK、AST、LD、ALP等升高,故一般主张抽血前24小时内不做剧烈运动。清晨取血,住院患者可在起床前取血,匆忙赶到门诊的人应至少休息15分钟后取血。

2.注意合理饮食。除了急诊或其它特殊原因外,一般主张正常饮食3天后采血,应避免暴饮暴食及刻意控制饮食。应在空腹10~14小时后第二天清晨采血。餐后或延长空腹时间(饥饿)均可引起血液化学成分的改变。餐后血糖、血钾、碱性磷酸酶及甘油三酯通常升高,无机磷降低;饥饿时血糖及蛋白质降低、胆红素升高;另外饮食的量及质对检验结果也有影响,如高蛋白饮食可使血清尿素氮、血氨、尿酸升高;高脂肪饮食引起乳糜微粒血症,导致血清脂血(混浊);饮水过多或过少可使血清稀释或浓缩;含咖啡因的饮料可使儿茶酚胺释放等。

3.饮酒的影响。饮酒后即刻导致血清乳酸、尿酸升高;连续饮酒导致AST、ALT上升,而GGT上升最为明显。长期饮酒者往往有高甘油三酯血症,GGT也会长期异常。

4.情绪影响。避免紧张、情绪激动,否则可以影响神经-内分泌功能检验项目。急促呼吸可使血清乳酸等升高。

5.药物影响。很多药物进入人体后可使某些化验项目的结果增高或降低,如咖啡因可使血糖和胆固醇增高;冠心平可使甘油三酯和乳酸脱氢酶降低;维生素C可使乳酸脱氢酶降低;口服避孕药可使转氨酶升高等。故患者在化验前应尽可能停服对检验有干扰的药物。

6.取血时体位的影响。体位(站立、坐位、卧位)改变可以引起某些化验指标的显著变化,故建议坐位5分钟后取血为宜。

2.1.1.5样本采集人员的注意事项

采集样本过程中应佩戴手套,每位患者使用一张消毒垫巾,一根止血带。准备下次采血前应进行手部消毒。废弃针头应置于锐器盒中。

2.1.2动脉血样本

2.1.2.1采集方法

1.动脉血样本采集使用一次性肝素化注射器,从患者股动脉、肱动脉或桡动脉取血。按标准程序准备采血部位,把动脉采样器的活塞设置到所需样本量刻度上,样本量为1.0~1.5ml。

2.结束动脉穿刺后,把采样器包装内的立方形塑胶块放置到一个水平的位置,把针头插入到塑胶块内,然后用钳子把针头从采血器上旋转去除。用采血器包装内的密封冒密封采血器。

3.上下颠倒采血器数次,然后在手掌中来回滚动采血器数次,确保血液样本与采血器中的肝素充分混匀后,立即送检。

2.1.2.2注意事项

1.抽血过程中出现的小气泡须在抽血后立即排出,然后隔绝空气对于保证结果的真实性极其重要。空气中的氧分压高于动脉血,二氧化碳分压低于动脉血。气体从高分压流向低分压,使血液中pO2及pCO2都改变,检测结果不能真实反映体内状况。

2.血气样本应尽快送检(2~8℃冷藏情况下不超过30分钟)。抽血后,由于血细胞还在继续新陈代谢,使pH、pO2下降,pCO2升高,时间过长影响结果的真实性。

2.1.3血培养样本

2.1.3.1采集方法

采用无菌操作技术用注射器抽取患者静脉血或体液,成人:16~20ml;婴幼儿:1~5ml,并立即注入血培养瓶中(成人常规用需氧、厌氧两种培养瓶各注入8~10ml检测样本,婴幼儿一般情况下只需注入儿童瓶。分枝杆菌/真菌培养瓶需抽取1~5ml静脉血或无菌体液),颠倒混匀数次,室温下2小时内送检。

2.1.3.2注意事项

1.样本采集时间应在病人发热初期,并且要在用抗生素之前,只有这样才能得到较高的阳性率。若已用药应注明,且在下次用药前采集样本。

2.大多数的菌血症是间歇性的,往往需要以反复多次血培养阳性来证实。3.采血量一般为培养基的1/5~1/10,婴幼儿采血1~5ml;亚急性感染性心内膜炎及布氏杆菌病,要多次采血和增加采血量。

4.采血过程中应严格无菌操作,避免污染。

5.注意血培养瓶的选择。常规用普通需氧、厌氧培养瓶,已使用抗生素的患者用加活性炭的需氧、厌氧培养瓶。

6.样本在送检过程中千万不要打开瓶塞,不要将样本中的液体倾倒,以避免空气中细菌污染样本,同时杜绝传染性样本污染环境。

7.化验申请单一定要完整清楚,特别是样本来源、是否用过抗生素、采样时间、临床诊断等,有利于化验室综合分析判断,得出准确结论。

8.实验室根据样本来源和可能存在的病原菌确定选用各种分离培养基及孵育环境,以期提高细菌检验的准确性。

9.如果在节假日或夜间不能及时送至细菌室,需室温保存,不能放入冰箱,上班后及时送检。

10.门急诊病人需在条码或化验单上留下联系方式,以便细菌室及时电话报告阳性结果。

2.1.4末梢血样本

2.1.4.1采集方法

轻轻按摩采血部位,使血液流动充分,用75%的酒精棉球进行局部消毒,使其自然干燥。紧捏住刺血部位,用一次性刺血针快速刺入皮肤,深度大约为2~3mm,以稍加挤压使第一滴血能够自然流出为好。用消毒棉球擦去第一滴血,稍加压力使血液从伤口处流出,取采血管接取血液,取血量以μl为佳,轻轻摇动试管,使血液与抗凝剂充分混合达到抗凝的目的。采血完毕后用消毒棉球压住伤口止血。

2.1.4.2注意事项

1.采血部位:成人及儿童以手指指腹为好,婴幼儿可以取足底部内外侧缘。选择取血部位时应注意避开发炎、冻疮、水肿、伤口、淤青等部位。

2.采血前应叮嘱患者保持平静,如剧烈运动后、患者躁动、哭闹时应暂缓取血。

3.正在输血的患者,应在输血后取血或从另一侧手指取血。

2.2尿液样本

2.2.1尿常规(RT)、尿沉渣、尿妊娠(hCG)试验

2.2.1.1留取方法

取清洁干燥一次性尿杯一个(如在家中留取,容器应清洁干燥,不含任何药物),留取新鲜中段尿(连续排尿不中断,此时截取中段排的尿)作为送检样品约10~12ml,倒入一次性尿管内。样本送达最佳时间为半小时以内,最长不要超过2小时。

2.2.1.2注意事项

1.样本以清晨第一次为宜,清晨第一次尿液为浓缩尿,各种有形成分及激素(如hCG)含量较高,易于检出,但尿常规和尿hCG也可随时留取。

2.样本留取前最好清洁尿道口及外阴,同时避免经血、白带、精液、粪便等混入污染。

3.容器中应尽量避免药物和各种消毒剂的存在,防止破坏样本中各种有形成分的形态及激素活性。

4.注意将条形码竖向、严密粘贴于尿管壁上。

5.样本应尽快送达,否则可造成尿中细菌生长繁殖,导致尿素酵解,使尿pH升高,有形成分被破坏(管型分解、红细胞溶解);葡萄糖被降解,使病理性糖尿消失;细菌菌体蛋白与病理性蛋白尿相互干扰。尿中的化学成分(尿胆原)可因尿久置而变性、分解。尿中盐类因久置而析出结晶干扰显微镜检查,从而影响尿液的结果判断。

2.2.2乳糜尿样本

用于丝虫病和某些肿瘤患者的诊断。尿样本可随时留取,注意事项同尿常规样本,切忌混有油迹。

2.2.小时尿样本

24小时尿样本可用于检测24小时尿生化电解质(U-K、U-Na、U-Cl、U-UN、U-Cr和24小时尿蛋白(U-Pro)定量,需添加防腐剂;24小时U-Ca、U-P,24小时尿轻链检查不可添加防腐剂。

2.2.3.1留取方法

准备清洁干燥大容器(最好有盖)。对于指定需要添加防腐剂的样本应提前领取防腐剂管,在第一次留尿时将防腐剂倒入容器中,并与尿液混匀。病人于清晨7时排尿弃去,以后每次尿均收集于容器中,至次日晨7时最后一次所排尿液也收入容器中。测量尿液总量,以毫升(ml)或升(L)表示,。将全部尿液充分混匀后,取4ml左右倒入5ml带盖小试管/防腐剂小管内,并在小试管/防腐剂小管的条码明显处记录尿量,立即送检。

2.2.3.2注意事项

样本留取过程中应避免混有血、脓或阴道分泌物等可引起假性蛋白尿的成分。24小时尿样本收集过程中最好放置2~8℃冰箱中冷藏保存,以减少微生物生长,维持尿液pH的恒定,如无条件也可放置于阴凉通风处。

2.2.48小时尿微量白蛋白排泄率(UAE)

2.2.4.1留取方法

准备清洁干燥大容器(最好有盖)。留取样本前领取防腐剂管,在第一次留尿时将防腐剂倒入容器中,并与尿液混匀。病人于晚22时排尿弃去,以后每次尿均收集于容器中,至次日晨6时最后一次所排尿液也收入容器中。测量尿液总量,以毫升(ml)或升(L)表示。将全部尿液充分混匀后,取4ml左右倒入5ml带盖小试管/防腐剂小管内,并在小试管/防腐剂小管的条码明显处记录尿量,立即送检。

2.2.4.2注意事项

样本留取过程中应避免混有血、脓或阴道分泌物等可引起“假性蛋白尿”的成分。8小时尿样本收集过程中最好放置2~8℃冰箱中冷藏保存,如无条件也可放置于阴凉通风处。样本保存时间小于4小时(例如有的患者8小时仅在清晨排尿一次),也可不加防腐剂。

2.2.5尿普通培养及厌氧培养

2.2.5.1留取方法

准备无菌小瓶。患者自己留取样本时,先以肥皂水清洁外阴;也可由护士完成清洁消毒工作,程序如下:用0.1%新洁尔灭消毒尿道口及外阴(女性用棉球蘸消毒液,以尿道口为中心,自上而下、自内而外擦洗尿道口、小阴唇及大阴唇2次。男性应将包皮翻上,用棉球蘸消毒液,以尿道口为中心,向外旋转擦洗2次,注意洗净包皮及冠状沟;棉球不可往返使用),然后用无菌棉球擦干,并由病房或治疗室护士完成尿道口及外阴消毒。消毒后,病人自行排尿,尿流不要中断,排尿过程中,将前段尿弃去,用无菌小瓶接中段尿,盖好瓶盖立即送检。

2.2.5.2注意事项

1.勿加防腐剂。

2.用无菌带盖小瓶或无菌尿盒,勿用尿常规项目所使用的锥形塑料管。

2.2.6尿抗酸染色、分枝杆菌培养

2.2.6.1留取方法

取清洁容器收集清晨第一次全部尿液或24小时尿液沉淀10~15ml送检。

2.2.6.1注意事项

1.留尿前晚尽量少饮水。

2.勿加防腐剂。

2.2.7卟啉尿样本

用于血卟啉病的诊断。留尿过程同尿常规样本。但应注意留尿前勿饮酒,勿服巴比妥类、磺胺类、利眠宁、眠尔通、苯妥英钠等药物,样本送检过程中勿暴露于阳光下。

2.2.8尿含铁血黄素检测样本

采集方法及注意事项同尿常规样本。

2.2.9新生儿尿液样本

2.2.9.1留取方法

准备口径2-3厘米的清洁干燥小瓶1个、胶布4条及尿布。留取样本前清洁婴幼儿尿道口及外阴,检查小瓶口有无破损,用3条胶布按三等份分粘于瓶颈处,再将另一条胶布围绕瓶颈粘牢其他三条胶布。给患儿更换尿布,男婴将阴茎头放入瓶内;女婴将大阴唇分开,使瓶口斜对患儿尿道口。将中间一条胶布向上粘牢于耻骨联合处,再将其余两条胶布粘于两腿内侧,避免粘于阴唇及腹股沟上。使小瓶向下斜方向垂于尿道口下,用尿布托住,使之位置合适稳固,并将床头略垫高,以利尿液流入瓶中。随时观察流尿情况,待尿流出,即取下小瓶,以防尿液歪倒。将收集成功的尿液(不少于4ml)倒入一次性尿管内送检。留取过程中如有粪便污染要重新留取。尿样本可随时留取。

2.2.9.2注意事项

同尿常规样本。

2.3粪便样本

2.3.1粪便常规(RT)及隐血(或称潜血,OB)试验

2.3.1.1留取方法

用竹签挑取少许新鲜粪便(约蚕豆大小),应选择其中有脓血、粘液的部分或颜色异常部分,如无异常,则可自粪便表面不同部位及粪便深处多部位取材,放入干燥清洁有盖的蜡纸盒或塑料盒内立即送检,一定不要超过2小时。

2.3.1.2注意事项

1.使用新鲜样本,采集后立即送检。样本久置可因pH及消化酶等因素而使粪便中细胞成分分解破坏。

2.样本中不可混有尿液,更不可从尿壶或便盆中采取粪便样本,因为尿液可使粪中柔弱的原虫致死。

3.粪便样本中也不可混入植物、泥土、污水等,因腐生性原虫、真菌孢子、植物种子、花粉易混淆实验结果。

4.无粪便而又必须检查时可经肛门指诊获取粪便。灌肠后的粪便常因过稀及混有油滴等而不适于作检查样本。

5.粪便样本不应用卫生纸包裹,应直接装入蜡纸盒或塑料盒,以防水分丢失细胞被破坏。

2.3.2粪便寄生虫检查样本

2.3.2.1留取方法

同便常规检查。

2.3.2.2注意事项

1.一般的同便常规检查。

2.检查阿米巴滋养体应于排便后立即从脓血性或稀软部分取材,迅速(2小时内)送检,患者在家中留取样本时,送检过程中应采取保温措施,因为阿米巴原虫可在低温下失去活动力从而不易查到。

3.检查蛲虫卵时,在清晨排便前自肛门四周皱襞处拭取样本,尽快(2小时内)送检。

2.3.3粪便培养样本

2.3.3.1留取方法

准备无菌便盒。采集新鲜粪便样本的过程应尽量无菌操作。

①直肠拭子法:用无菌拭子蘸生理盐水湿润,由肛门插入约6~px,轻轻在直肠内旋动取出大便少许,放入无菌便盒中,加盖封口送检。

②自然排便法:病人在清洁便盆内排便,用竹签挑取大便中脓血或粘液部分(约栗子大小,2~3g;液体粪便取絮状物2~3ml),放入无菌便盒中送检。

2.3.3.2注意事项

1.所挑取的大便不应接触其它部位(如便盆),粪便样本中不可混入尿液及其它异物。

2.尽可能在使用抗生素使用之前收集粪便。

3.便厌氧培养(即难辨梭状杆菌培养)需要用带盖尿常规塑料管留取2/3量以上送检。

2.4痰液样本

2.4.1痰涂片及痰培养

2.4.1.1采集方法

准备无菌痰盒或痰杯。一般检查应采集清晨第一口痰为宜,患者晨起用清水反复漱口或刷牙,然后用力咯出气管深处痰液>2ml,盛于无菌痰杯内,盖紧盖子,贴好条码。对无痰、少痰或痰脓不易咯出者,可用45℃加温生理盐水(0.9%NaCl)雾化吸入诱导;对于小儿可轻压胸骨柄上方以诱导咯痰。

2.4.1.2注意事项

1.务必采集下呼吸道痰,切勿混入唾液及鼻咽分泌物,非下呼吸道样本对于评价下呼吸道感染没有临床意义。

2.痰样本是否来自下呼吸道,将根据痰涂片结果进行评价。非下呼吸道样本仅进行培养,不详细鉴定到种,不做药敏试验,建议重新留取下呼吸道样本。

3.样本务必在2小时内送检,否则将导致苛养菌(如肺炎链球菌和流感嗜血杆菌等)死亡,降低其培养阳性率。如确实无法在2小时内送检,可将样本暂时保存在4oC,以免非苛养菌过度生长,但应注意这样会降低苛养菌培养阳性率,应在无菌痰盒或痰杯上注明“样本送检前在4℃保存XX小时”,并告知临床医生。

2.4.1.3细菌室微生物样本特殊说明

下吸道样本:深部痰、纤支镜吸取物、气管及支气管吸取物、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、保护性毛刷采样和人工气道分泌物等,建议临床使用“细菌涂片+培养+药敏”组合,以方便临床评估此痰是否为下呼吸道痰,进而与痰培养结果相比较。实验室对于非下呼吸道样本仅做培养,不详细鉴定到种,不做药敏,建议重新留取下呼吸道样本复查。

2.4.2痰液细胞学检查或痰找瘤细胞

于上午9~10时用力咯出气管深处痰液(清晨第一口痰在呼吸道停留时间长,细胞变性结构不清),盛于专用痰杯内立即送检,应尽量送含血的病理性痰液。

2.5脑脊液样本

2.5.1采集方法

一般由医生通过腰椎穿刺术(腰穿)获得。采集的脑脊液分别收集于3只无菌小瓶内,每瓶0.5~1ml。第一瓶可用于细菌学检查,第二瓶用于生化及免疫学检查,第三瓶用作细胞学检查。

2.5.2注意事项1.注意第一瓶样本应保温送检(20℃),不可置冰箱保存,否则会使病原菌死亡,尤其是脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌。

2.第三瓶应避免样本凝固,遇高蛋白样本时,可用EDTA盐抗凝。

3.样本采集后应立即送检(1小时内),以免放置过久细胞破坏,影响细胞计数及分类;葡萄糖分解,使糖含量降低(若要保存较长时间,应加入氟化钠抗凝);病原菌破坏或溶解,影响细菌检出率;凝块形成,影响细胞计数等等,使检验结果不准确。

2.6浆膜腔积液样本

2.6.1采集方法

由医生采用穿刺术而获得。医生根据病情及穿刺目的,确定检查部位(胸腔、腹腔、心包腔等),患者采取相应的体位配合,然后医生采用无菌操作,选择穿刺点,穿刺抽吸积液。采集顺序为生化,细菌培养,常规。

2.6.2注意事项

1.常规和生化检查:建议使用肝素锂抗凝采血管(绿头管),以避免凝块形成、细胞发生变性、破坏而影响结果。

2.细菌培养、药敏试验:用无菌小瓶留取样本,加盖送检。

3.样本应及时送检,放置过久细胞发生变性、自溶。

2.7骨髓样本

骨髓样本一般由医生通过骨髓穿刺术获得。采集的骨髓液收集于无菌肝素抗凝管内,根据不同试验的要求,取2~6ml。

2.8十二指肠引流液样本

2.8.1采集方法

术前禁食12小时,在空腹状态下,用消毒液(Dobell液或3%双氧水)漱口后,将消毒的十二指肠引流管(双腔管)经口插入胃内约50~px,把胃内容物全部抽出,注入温水50ml。患者取右侧卧位,垫高臀部继续插管,并经常抽取少量液体,根据液体性质判断引流管头端位置,插入约px后采集D液(淡黄色、清晰、较粘稠碱性的十二指肠液),注入温热的33%硫酸镁50ml,分段采集A胆汁(金黄色略粘稠的总胆管胆汁)、B胆汁(棕褐或深褐色粘稠的胆囊液)、C胆汁(柠檬黄色稀薄的肝胆管液)。需作细菌培养时,以无菌操作将引流液各1ml分别注入无菌培养瓶中,标明A、B、C、D,并需用酒精灯火焰烧瓶口消毒,盖无菌棉塞。样本应即刻送检,因胰蛋白酶能迅速分解细胞成分,最好在引流床旁镜检,若不能立即检查,必须于样本中加入40%福尔马林(6~8滴/10ml引流液)以固定其细胞成分。

2.8.2注意事项

1.生化样本建议使用肝素锂抗凝采血管(绿头管)。

2.注意插管禁忌症及判断引流管是否在胃内,注意患者的配合等。

3.注入硫酸镁后仍未见胆汁流出,可再注入50ml,若仍无胆汁流出,表示胆管痉挛或梗阻。如引流管在1~3小时内仍不能进入十二指肠,为了减轻患者痛苦,可停作或延期再作。

2.9胃液样本

2.9.1采集方法

医生采用插胃管法抽取获得胃液样本。样本采集后应尽快送检。

2.9.2注意事项

患者经12小时禁食、禁饮、禁药、禁烟。

2.10唾液样本

2.10.1采集方法

采集唾液样本时,患者先用温水漱口,漱毕5~10分钟后采集。根据病情需要可以采集单一腺体的或所有腺体的混合液,后者更为常用。采集时,可直接使用导管自各腺体的开口处吸取,或将自然流出的唾液收集在干净试管内,离心分离,吸取上清液供检验。如果患者不易自然流出唾液,可将(1)少量消毒脱脂棉球放入患者舌下数分钟,取出棉球挤压得到唾液;(2)嘱患者咀嚼石蜡或橡皮圈来刺激唾液的分泌。

2.10.2注意事项1.采集方法(刺激和无刺激采集唾液)不同,其成分浓度也不同,应加以注明。

2.在采集测定唾液治疗药物浓度的样本时,应注意避免口服药物在口腔内残留造成的污染而使结果偏高的问题。

2.11精液样本

2.11.1采集方法

患者通过手淫法或体外排精法将精液全部射于清洁干燥的玻璃或塑料容器内,勿遗漏。取得样本后应于30分钟内立即送达。

2.11.2注意事项

1.患者检查前5~7日内应禁欲(无性交、手淫及遗精),即5~7日内未排精。

2.天冷时样本要保温送检,因温度低于20℃影响精子活力。

3.不能用乳胶避孕套采集精液,因避孕套内的滑石粉可杀死精子或抑制精子活力,影响检验结果的准确性。

4.因精子生成数目变化范围较大,精液常规检查若出现一次异常结果,应隔1周后复查。连续检查2~3次。样本送检时需注明采取时间和前次排精日期。

2.12前列腺液样本

2.12.1采集方法

医生通过肛门指诊,用前列腺按摩法采集前列腺液。在嘱病人排尿后,先自上而下纵向按摩前列腺左右两叶各2~3次,或从前列腺的两侧向中间沟各按摩2~3次(不可往返按摩),再挤压会阴部尿道,使前列腺液从尿道口滴出。直接将前列腺液(第一滴弃去)滴于载玻片上及时送检。

2.12.2注意事项

1.前列腺急性炎症、结核、脓肿或肿瘤则禁忌按摩,以免引起播散。

2.样本采集失败或检验结果阴性,如有临床指征,需隔3~5天后再重复按摩采集。

2.13阴道分泌物样本

2.13.1采集方法

阴道分泌物俗称“白带”,由医生借助阴道窥器,于阴道后穹窿采集,并将阴道分泌物用生理盐水涂片后立即高倍镜检查其清洁度;革兰氏染色油镜查找淋病奈瑟菌、白色念珠菌、阴道加特钠菌等。

2.13.2注意事项

1.取分泌物前24~48小时避免性交、阴道灌洗或局部用药,不作双合诊检查。

2.取分泌物时阴道窥器不涂润滑油(必要时可涂生理盐水润滑),以免影响检查结果。

3.阴道滴虫在25~42℃下可活动,故样本应保温送检。

4.沙眼衣原体直接涂片需用无水乙醇固定后送检。

2.14羊水样本

2.14.1采集方法

医生通过羊膜腔穿刺术获得羊水样本。属中期妊娠的羊水细胞,可作染色质检查、细胞培养、染色体核型分析或先天性代谢缺陷病检查;属晚期妊娠的羊水沉渣,多作含脂肪细胞及其他有形成份的检查。

2.14.2注意事项

羊水抽取后应立即送检,以免细胞成分崩解,化学成分及酶类的变质和失活。

2.15治疗药物浓度监测样本

治疗药物监测(TDM)是通过监测体液中药物或其代谢产物浓度,来评价药物治疗效果,以指导临床合理用药。最常用的监测体液是血清,其次是血浆和全血,也可用唾液。样本采集采血时间(时机)很重要。TDM测定的是稳态药物浓度,即一般连续给药4~5个半衰期(不同的药物半衰期不同)后,血药浓度达到稳定状态(不同的药物达稳态浓度的时间不同)时测定的数值,但这时的药物浓度在每次服药前后有一定的变化,清晨服药前取血测定的血药浓度相对较低称为谷浓度,可以了解所用药物剂量是否达到疗效浓度;服药后数小时取血测定的血药浓度称为峰浓度(不同的药物或同一种药物给药途径不同,达峰浓度的时间不同),可以了解所用药物是否过量中毒。对大多数药物来说,峰值与谷值都应保持在有效治疗浓度范围内,峰值不能进入毒性范围,谷值不能低于有效浓度。医生可根据需要选择测定谷浓度、峰浓度,但测定前应了解药物的半衰期、达稳态浓度时间、达峰浓度时间,这样才能正确确定采血时间(参见表1)。如果需要调整用药剂量,则应在达到新的稳态后再测定。影响血药浓度的因素有很多,如①同时使用多种药物,药物之间可相互影响(拮抗或协同);②药物的代谢过程(吸收、分布、利用、排泄)存在个体差异;③实验室测定方法不同,所测定的物质(母药或其代谢产物等)也不同,实验结果解释不同。医生只有通过上述综合信息才能评价药物疗效。

表1几种常用药物的采血时间

药物名降解半衰期(hour)达稳态浓度时间(day)达峰浓度时间(hour)

地高辛36~~.5~5.0

洋地黄毒甙~~6

苯妥英钠18~30(成人)5~14(成人)4~8

12~22(儿童)2~5(儿童)

卡马西平10~30(成人)7~14(初次用药)6~18(初次用药)

8~9(儿童)4~5(调整剂量)3(长期用药)

丙戊酸钠10~12(成人)2~30.5~1.5(空腹)

8~15(儿童)2.0~8.0(饭后)

苯巴比妥72~96(成人)14~21(成人)1~3

62(儿童)10~18(儿童)

扑痫酮6~82~33

茶碱3~8(成人)16~37(成人)2~3

1~8(儿童)6~44(儿童)

2.16用于基因扩增检测的临床样本

2.16.1血液

一般采用红色非抗凝血清管。如需要抗凝处理,首选的抗凝剂为EDTA和枸橼酸钠,不能使用肝素抗凝,肝素是Taq酶的强抑制剂。RNA检测的样本应在4小时内送检;DNA检测的样本应在12小时内送检。

2.16.2尿液

2.16.2.1DNA检测

包括NG-DNA、CT-DNA、UU-DNA、HSV-Ⅱ-DNA等DNA检测。患者必须在取样前2小时禁小便。用无菌生理盐水清洗男性尿道口或女性外阴和尿道口,然后用高压处理过的无菌器皿收集10-50ml的初尿(即开始尿出的部分),不做防腐处理。样本留取后12小时内送检。

2.16.2.2RNA检测

患者必须在取样前2小时禁小便。用无菌生理盐水清洗男性尿道口或女性外阴和尿道口,然后应用分子生物学实验室处理过的容器。收集10-50ml的初尿(即开始尿出的部分),不做防腐处理。样本留取后立即送检,最长不超过4小时内送检。如不能及时送检,可将样本放在-20℃冷冻保存。

2.16.3脑脊液、胸腹水、穿刺液、肺泡灌洗液

在严格无菌操作下,收集到经高压处理的无菌瓶内。样本留取后4小时内送检。如不能及时送检,可将样本放在-20℃冷冻保存。

2.16.4乳汁

先用70%酒精清洁乳头,再用无菌生理盐水清洁乳头,挤出的乳汁,前几滴弃去,然后用无菌的器皿留取约4-5ml的乳汁用于检测

2.16.5痰液及粪便

留取同痰培养及便培养。

2.16.6阴拭子

患者必须在取样前2小时禁小便。用无菌生理盐水清洗男性尿道口或女性外阴和尿道口。①男性患者使用无菌细小棉拭子伸入尿道约2~4厘米,捻动拭子采集分泌物,将棉拭子置入无菌管,密闭送检。②女性生殖道样本:用无菌棉拭子插入宫颈内,停5秒钟后旋动棉拭子采集宫颈分泌物,将棉拭子置入无菌管,密闭送检。女性尿道样本:用无菌棉拭子插入尿道约2厘米,捻动拭子采集分泌物,将棉拭子置入无菌管,密闭送检。

2.16.7鼻、咽拭子

用无菌棉拭子取咽部分泌物后,将棉拭子置入无菌管,密闭送检。

2.16.8组织样本

在严格无菌操作下,将新鲜组织样本收集到分子生物学实验室处理过的容器内。样本留取后立即送检,最长不超过4小时内送检。如不能及时送检,可将样本放在-20℃冷冻保存。

2.17血浆肾素活性和血管紧张素II检测样本

2.17.1采集方法

静脉取血4ml,拔掉针头后将血注入到含酶抑制剂的抗凝管中(采血管应有盖或塞),将管口盖好或封好后上下颠倒数次,使酶抑制剂与血液充分混匀后即刻放入冰水浴中或4C冰箱内。

2.17.2注意事项

1.血样本采集后立即轻轻摇匀(上下颠倒8次),使酶抑制剂与血液充分混匀。

2.血样本放置冰水中转运至检测实验室。

3.阻滞剂、血管扩张剂、利尿剂及甾体激素、甘草等影响体内肾素水平,一般要在停药后两周测定PRA,利血平等代谢慢的药物应在停药后三周测定。停药不适的病人可改服胍乙啶等影响PRA较小的降压药。

4.钠摄入量影响PRA水平,故病人测定PRA三天前应适当减少食盐摄入量。病人应测定取血前24小时尿钠含量,以供分析PRA结果时参考。

5.激发试验:病人清晨不起床或空腹平卧两小时,可在6::00之间抽取基础态血,然后肌肉注射速尿0.7mg/kg体重,总剂量不大于50mg,保持立位两小时(可以走动),即坐取激发态血。

6.注射速尿后两小时内随尿排出的水和电解质的量较多,如病人血钾过低,试验前应适当给予补充。试验过程中病人可能出现口渴、无力、出汗等症状,一般不重。如过重,应酌情终止试验,让病人平卧,给予糖盐茶水。

3.样本拒收规则

为防止不合格样本的检验结果用于患者的诊疗过程,遇以下情况将按SOP文件要求拒收样本。

3.1样本量不符合要求

1.三全或两全组合,总血量少于3ml,离心后血清或血浆量少于1.5ml;

2.生化少于15项的组合,总血量少于2ml,离心后血清或血浆量少于1ml;

3.生化少于5项组合或单项,总血量少于1ml,离心后血清或血浆量少于μl;

4.铁三项,铁蛋白,叶酸,维生素B12组合,总血量少于3ml,离心后血清或血浆量少于1.5ml;

5.酸溶血+糖水组合,血清管总血量少于2ml,离心后血清量少于1ml;

6.血小板相关抗体(PAIgG),全血管总量少于4ml;

7.血氨检测未抽满一管;

8.出凝血样本过多或过少,超出允许范围±15%;

9.静脉血常规样本采血量少于1ml。末梢血少于μl;

10.血沉样本血量不符合1.6ml;

11.血气样本少于1ml;

12.骨髓液标本少于2ml;

13.尿常规样本少于4ml,尿液沉渣样本量少于10ml;

14.尿生化样本少于1ml;

15.尿含铁血黄素试验标本量少于10ml;

16.大便样本量极少(少于1粒黄豆量);

17.需氧、厌氧两种培养瓶少于8~10ml,儿童瓶少于1~5ml;

18.空管。

3.2样本质量不符合要求

1.收集容器不正确,如血清样本用了抗凝管,血浆样本错用普通管,用普通大便盒留取培养样本等。

2.检验样本类别不符,如条码注明样本类型为血,但送检样本为胸水。

3.样本外部有严重的遗洒、渗漏,怀疑样本可能交叉污染的。

4.经询问确认样本采集部位不正确的或患者状态不适合做相应检查的,如正在输入脂肪乳的患者检测血脂,正在输入葡萄糖的患者抽血测定血糖。

5.经询问确认样本保存、运输方式不正确的。

6.样本离心后出现溶血(除外新生儿、烧伤及血管内溶血患者);对于新生儿、烧伤患者溶血样本,以下项目由于影响较大不进行检测:K、Cr、LD、AST、CK、TBil、DBil、ALP、Glu、P、ADA、凝血Ⅰ、蛋白电泳、cTnI、Myo、CEA、CMVPP65及其它由仪器报警提示溶血干扰测定的项目。

7.严重脂血样本,经电话联系正在或刚刚输完脂肪乳<4h的,若为危机抢救患者,则仅报告急诊项目,但对高速离心后检测仪器仍有报警符号的则不能报告。

8.出凝血项目、骨髓样本、抗凝静脉血、动脉血及末梢血样本出现凝块,血气检测动脉血中有气泡。

9.前列腺液样本量少、盖片不严密样本已干。

10.胸、腹水或引流液样本过于混浊、粘稠,离心后仍无明显变化则无法测定,如有必要可采用肝素抗凝管采集。

11.疑为输液同侧抽血或混有其它液体,经联系后确认样本确有污染或无法确认污染但结果直接提示污染的不发报告。

12.巨细胞病毒抗原血症(CMVPP65)样本的检测必需按照以下要求抽血,否则视为不合格样本:

■样本白细胞计数必须>1.0×10^9/L,否则不能提取足够数量的白细胞,无法检测。

■白细胞计数在1.0~4.0×10^9/L之间的患者至少需要抽5~6ml血量,否则不能提取足够数量的白细胞,影响实验结果。

3.3样本时限控制不符合要求

1.经询问,确认样本超过样本允许送达时间的,如尿液沉渣样本送检时已超过2小时,或非晨起第1次或第2次尿样本;检测项目中包含K、Glu、P、TCO2、LA、HCY、胆红素,则超过2小时拒收,如检测项目中包含Amon的样本,血气样本超过30分钟拒收。

2.审核报告时发现样本超过有效检验时间或污染的,也应视为不合格样本,按拒收样本处理,不能发出报告。

3.4其它特殊情况

1.非本实验室检验项目的样本。

2.条码缺损,条码号不完整;条码和样本已经分离,样本容器上无明确患者标识,无法确认样本正确归属的。

3.纸质申请单无检验项目或检验项目不清楚的样本;姓名明显变更或出现多个姓名,病历号与姓名不符;申请单与样本分离,无法确认样本正确归属的。

4.如果原始样本不可替代或很关键,如脑脊液、血气样本等拒收应慎重。这些样本在拒收前应与临床医生进行充分沟通,以求寻找补救办法。

4.如何看检验报告单

基本信息检验报告单的最上方为该样本的基本信息,包括患者姓名、年龄、性别、样本种类、诊断、送检项目、样本号等。

检测当天样本号为患者样本的唯一性标识,检验报告单的样本号与检验申请单和患者样本管/容器的样本号始终保持一致,即唯一对应。

样本种类一栏将标明所对应样本的种类,主要包括血、尿、便、引流液(胸水、腹水、脑脊液)等。

结果检验报告单的核心部分即检验结果,报告形式为项目(英文缩写)、中文名称、结果、标记和参考范围。

如果检验结果高于参考范围的上限,则标记H;如果检验结果低于参考值范围的下限,则标记L。

参考范围与分界值(cutoff值):目前检验结果报告单大部分项目的参考范围一栏给出的是该项目的参考值区间,而某些项目给出的是分界值。

参考值不等于正常值。一般情况下,常选择95%分布范围的大小表示参考值区间。

分界值又称cutoff值,指划分诊断试验结果正常与异常的界值。即根据不同的目的,研究健康(或称非病理的)与病理的分界水平。分界值的选择方法一般是先初步确定几个分界值,分别计算真阳性、真阴性、假阳性、假阴性数值,进一步计算诊断敏感性、诊断特异性等指标,最后根据早期诊断、疗效观察、流行病学调查等各种不同目的确定分界值。

其它检验报告单的其它内容还包括备注、送检报告时间、检验者和审核者。

备注栏非常重要,可能包括:

样本的性状(溶血、脂血可能干扰某些项目测定);

样本采集时间(抗凝治疗监测、心肌梗死病情及治疗监测、补液、透析等情况,同一患者一天内可能多次检查同一项目);

样本采集部位(如胰腺引流的部位);

检验医师对异常结果进一步检验的建议(如建议查血涂片);

检验人员对可疑样本的重复测定情况等。

如果对患者的检验结果有疑问,也可以直接和检验报告单上标注的检验者或审核者联系。

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